Browsing by Author "Moreira, Joana Isabel Fidalgo Avelar"
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- Avaliação do Ficol como crioprotetor de ovócitos imaturos com posterior descongelação, maturação e fecundação in vitroPublication . Moreira, Joana Isabel Fidalgo Avelar; Andrade, Luís Pedro Mota Pinto de; Silva, Joaquim Fernando Moreira daOs objetivos do presente trabalho foram a avaliação da capacidade de fecundação in vitro e posterior desenvolvimento até ao estado de mórula compacta/blastocisto após congelação/descongelação de ovócitos imaturos bovinos, recorrendo ao ficol como crioprotetor. Desta forma foram então utilizados um total de 134 ovários recolhidos no Matadouro dos quais foram puncionados 1245 cumulus complexos ovocitários (COCs) classificados com classe A e B sendo estes divididos em dois grupos de trabalho: Grupo 1 - Avaliação da toxicidade dos crioprotetores (n=691); Grupo 2 - Avaliação da vitrificação de ovócitos (n=554). Os ovócitos pertencentes ao Grupo 1 foram usados para a avaliação do Ficol como crioprotetor sendo os resultados avaliados pela taxa de desenvolvimento nuclear após a sua maturação. Após observar que o Ficol não é toxico para os COCs, foi desenvolvida a segunda parte do trabalho (Grupo 2), onde após a descongelação, os ovócitos foram fecundados in vitro sendo avaliado o estado de desenvolvimento embrionário. No que concerne aos resultados da expansão das células do cumulus oophurus, observou-se uma menor taxa de expansão dos cumulus dos ovócitos submetidos ao meio de vitrificação contendo apenas DMSO (88,7±2,6), quando comparados com os resultados do DMSO + Ficol (91,8±2,2) (p <0,05). No grupo controlo a taxa de maturação avaliada por este critério foi de 92,9± 1.6, sendo também estatisticamente superior ao grupo onde foi apenas usado DMSO como crioprotetor (P<0,05). Na avaliação da taxa de maturação, recorrendo ao desenvolvimento nuclear, não foram registadas diferenças significativas na percentagem de ovócitos maturados, submetidos ao meio de vitrificação contendo DMSO (48,8%) quando comparados com os valores obtidos pelo grupo controlo (51,0%). A suplementação do meio de vitrificação com o Ficol não demonstrou nenhuma melhoria no desenvolvimento nuclear (44,1%) porém não se verificou que este crioprotetor tenha uma ação negativa no progresso de maturação nuclear. Em relação a taxa de sobreviventes, observa-se então uma diferença significativa (p <0,05), entre o grupo do DMSO (94.5±1.4%) e o controlo (100%) (p<0,05) sendo menor no grupo do DMSO + Ficol (85.6±7.0) (p<0,05). Em relação aos resultados referentes ao desenvolvimento embrionário no estado de 2 – 8 células, foram superiores no grupo controlo (67.9±5.1), sendo DMSO 26.5 (±1.8%) para o DMSO e 17.4 (±1.1%) e DMSO + Ficol (p<0,05). Nos restantes estados de desenvolvimento embrionário as diferenças observadas entre o DMSO (21.5±2.1%) e o DMSO + Ficol (22.3±5.7%) não foram estatisticamente significativas, no entanto o grupo controlo (52.0±8.4%) obteve sempre percentagens superiores, sendo estas diferenças significativas (P <0.05). Podemos então concluir que o Ficol ao não ser toxico para os ovócitos imaturos de bovinos trata-se de um crioprotetor com ação benéfica na maturação nuclear para o processo de vitrificação, pois protege os ovócitos da elevada toxicidade do DMSO.