Publication
Otimização da extração de DNA a partir de cladódios de Opuntia spp.
| dc.contributor.author | Raimundo, Joana | |
| dc.contributor.author | Reis, C.M.G. | |
| dc.contributor.author | Ribeiro, M.M.A. | |
| dc.date.accessioned | 2017-11-30T19:27:32Z | |
| dc.date.available | 2017-11-30T19:27:32Z | |
| dc.date.issued | 2017 | |
| dc.description.abstract | Existe um interesse crescente pelas espécies do género Opuntia spp. devido à sua rusticidade e às várias possibilidades de utilização económica que estas representam, nomeadamente na produção de fruto, forragem e nas indústrias farmacêutica e cosmética. A caracterização da diversidade genética por marcadores moleculares bem como a avaliação de germoplasma é importante no melhoramento de plantas e no desenvolvimento de novas cultivares. As plantas do género Opuntia spp. caraterizam-se por conter muitos polissacarídeos e metabolitos secundários que interferem na obtenção de DNA de alta qualidade. Por esta razão, vários métodos descritos na literatura e ‘kits’ comerciais disponíveis são, frequentemente, pouco eficazes na extração de DNA genómico. De modo a contornar este problema, foram testadas várias metodologias de extração de DNA a partir de cladódios de quatro espécies do género Opuntia (O. ficus-indica, O. robusta, O. dillenii e O. elata). Utilizaram-se três ‘kits’ comerciais, três versões modificadas do método padrão de brometo de cetil trimetil amónio (CTAB) e um método, por nós melhorado, que se baseia no método CTAB combinado como ‘mini kit’ comercial Plant DNeasy® (Qiagen). O protocolo combinado, permite a rápida extração de quantidades razoáveis de DNA genómico de alta qualidade em cladódios de todas as espécies utilizadas, destacando-se a O.dillenii e a O.elata como espécies onde o teor de polissacarídeos e metabolitos secundários é muito elevado. Foram obtidos em O. ficus-indica, O. robusta, O. dillenii e O. elata rendimentos em DNA de 10.5, 12.0, 13.2 e 15.9 μg.g-1 de tecido fresco, respetivamente. Com este protocolo, a pureza, avaliada pela razão A260/A280, foi respectivamente de 1.89, 1.75, 1.67 e 2.01. No entanto, quando utilizado isoladamente, o mini kit Plant DNeasy® permite extrair facilmente DNA de O. ficus-indica e O. robusta com rendimentos de 18.3 e 12.5 μg.g-1 de tecido fresco, respetivamente. Neste caso, a pureza, avaliada pela referida razão, foi de 1.84 e 1.74, respetivamente. A qualidade do DNA extraído foi confirmada pela amplificação de um conjunto de microsatélites nucleares obtidos para o género Opuntia spp. Da análise dos produtos amplificados, por electroforese em gel de agarose e eletroforese capilar em sequenciador, verificaram-se perfis de bandas e eletroferogramas reprodutíveis. | pt_PT |
| dc.description.version | info:eu-repo/semantics/publishedVersion | pt_PT |
| dc.identifier.citation | Raimundo J, Reis C M G e Ribeiro M M. 2017. Otimização da extração de DNA a partir de cladódios de Opuntia spp. 1º Congresso Luso-Brasileiro de Horticultura, ISCTE, Lisboa, Portugal. | pt_PT |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10400.11/5797 | |
| dc.language.iso | por | pt_PT |
| dc.peerreviewed | yes | pt_PT |
| dc.publisher | Associação Portuguesa de Horticultura | pt_PT |
| dc.relation | Financiamento FCT: Centro de Estudos Florestais (UID/AGR/00239/2013) e CERNAS-IPCB (UID/AMB/00681/2013) | pt_PT |
| dc.subject | CTAB | pt_PT |
| dc.subject | Figueira-da-índia | pt_PT |
| dc.subject | Extracção de DNA | pt_PT |
| dc.subject | Polissacarídeos | pt_PT |
| dc.subject | Viscosidade | pt_PT |
| dc.title | Otimização da extração de DNA a partir de cladódios de Opuntia spp. | pt_PT |
| dc.type | conference object | |
| dspace.entity.type | Publication | |
| oaire.citation.conferencePlace | ISCTE, Lisboa, Portugal | pt_PT |
| oaire.citation.title | 1º Congresso Luso-Brasileiro de Horticultura | pt_PT |
| person.familyName | Raimundo | |
| person.familyName | Gaspar Reis | |
| person.familyName | Ribeiro | |
| person.givenName | Joana | |
| person.givenName | Carlos | |
| person.givenName | Maria Margarida | |
| person.identifier | 349097 | |
| person.identifier.ciencia-id | A71B-FF9D-83C6 | |
| person.identifier.ciencia-id | AD12-4D32-7A48 | |
| person.identifier.orcid | 0000-0002-0850-4401 | |
| person.identifier.orcid | 0000-0002-4854-5128 | |
| person.identifier.orcid | 0000-0003-4684-1262 | |
| person.identifier.rid | M-4235-2013 | |
| person.identifier.scopus-author-id | 7201715611 | |
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