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- Adventitious rooting in microshoots of chestnut hybrid (Castanea sativa x C. crenata) in the presence of indole-3-butyric acid: The role of changes in endogenous indole-3-acetic acid, indole-3-acetylaspartic acid and indole-3- butyric acid levelsPublication . Gonçalves, José Carlos; Diogo, Maria da Graça; Coelho, Maria Teresa; Vidal, N.; Amâncio, SaraEndogenous levels of IAA, IAAsp and IBA were quantified during the first 8 days of in vitro rooting of the chestnut hybrid, clone M3 by high performance liquid chromatography. Rooting was induced either by dipping the basal ends of the shoots into 1 gl-1 IBA solution for 1 minute or by subculturing the shoots on agar rooting medium with 3 mgl-1 IBA for 5 days. For root development the induced shoots were transferred to auxin-free agar medium. Auxins were measured in the apical and basal parts of the shoots by means of high performance liquid chromatography. Endogenous levels of IAA and IAAsp were higher in IBA-treated shoots than in control shoots. In extracts of the basal parts of the shoots, the concentration of free IAA showed a transient peak at day 2, in both root inductive methods, a subsequent gradual decrease for the remainder of the time course was observed. The concentration of IAAsp peaked at day 6 in extracts of the basal parts of shoots induced with 3 mgl-1 IBA for 5 days, whereas shoots induced by dipping showed an initial increase until day 2, and then remained stable. In extracts from basal shoot portions induced by dipping and by IBA in the medium, IBA concentration showed a transient peak at 24 h and 48 h, respectively, remaining stable after day 4 for the dipping method, whilst showing a significant drop between day 4 and 6 for the other induction treatment. All quantified auxins remained at a relatively low level, virtually constant, in extracts from apical shoot portions, as well as in extracts from control of non-rooting shoots.
- Estudo anatómico da iniciação e desenvolvimento de raízes em rebentos de castanheiro regenerados in vitroPublication . Gonçalves, José Carlos; Diogo, Maria da Graça; Amâncio, SaraA fase de enraizamento continua a ser um passo chave em todo o processo de micropropagação, podendo de alguma forma condicionar o seu sucesso, com particular destaque para as espécies lenhosas. Daí que uma melhor compreensão dos aspectos biológicos envolvidos na formação de raízes adventícias, possa contribuir de uma forma decisiva para resolver algumas das frequentes dificuldades. Neste trabalho descrevem-se alterações anatómicas durante a formação de raízes adventícias em rebentos de castanheiro regenerados in vitro. A indução foi feita em meio de MS, com os macronutrientes reduzidos a metade e os nitratos a um quarto, e com 3 mgl-1 de AIB durante 5 dias, seguidos de transferência para igual formulação mas sem auxinas. As primeiras divisões celulares detectaram-se 24 h após os rebentos serem induzidos a formar um sistema radicular adventício. Estas divisões ocorrem em células derivadas do câmbio vascular e localizadas muito próximas deste. O posterior processo de diferenciação evolui no sentido de um incremento das taxas de divisão celular com a formação de meristemóides. Entre os dias 4 e 6 são já visíveis primórdios radiculares bem diferenciados, que se desenvolvem radialmente ao córtex com a posterior rotura de toda a camada epidérmica. Estes primórdios evoluem para raízes adventícias que podem ser observadas macroscopicamente entre o dia 10 e 12. Em simultâneo assiste-se a uma progressiva diferenciação do sistema vascular que acaba por se conectar com o sistema vascular do rebento. O aspecto anatómico destas raízes em corte transversal parece em tudo normal.
- Rooting and survival of cork oak (Quercus suber L.) cuttingsPublication . Ribeiro, M.M.A.; Raimundo, Joana; Amâncio, SaraThe cork oak (Quercus suber L.) has remarkable ecological, social and economic value in the Mediterranean region. Due to the growing economic interest in cork, human intervention in the plant production and renewal of this species is crucial. Thus, the optimization of the propagation methodologies to produce selected and improved trees for high quality cork production is a key factor in the species improvement program. Rooting and survival of cuttings are greatly affected by several external and internal factors. To circumvent this problem, experiments were made using young seedlings as a source of cork oak cuttings for two consecutive years. We studied the influence of the application of synthetic auxins, indole-3-butyric acid (IBA) and α-naphthalene acetic acid (NAA), the IBA concentration and the basal bark removal in rooting and survival of cork oak cuttings. The IBA improved the rooting, the survival and the mean length of the longest root per rooted cutting, but not the mean number of primary roots produced. The basal bark removal associated with 0.5% of IBA gave the highest percent of rooting and plant survival (60% and 54%, respectively). The application of 0.1% of NAA, the origin of the cutting (whether basal or apical) had no significant influence on the rooting and survival. Thus, it is possible to draw the conclusion that wounding along with 0.5 % IBA produced the highest percentage of rooting and survival with cuttings planted in April, however complementary studies involving different physical and chemical conditions are required.
- Alterações estruturais da base de estacas de sobreiro (Quercus suber L.) em enraizamento, após escurecimento e AIBPublication . Ribeiro, M.M.A.; Amâncio, Sara; Quilhó, T.; Graça, J.; Rodrigues, J.; Mata, M.I.S.Estacas em enraizamento, retiradas de jovens plantas de sobreiro com 7 meses, foram utilizadas na recolha de amostras para acompanhamento anatomo-histológico das modificações estruturais da sua base. As plantas-mãe foram submetidas durante um mês a um pré-tratamento de escurecimento, que consistiu no envolvimento da parte do caule correspondente à futura base da estaca por uma banda preta. Em metade das plantas sujeitas ao escurecimento aplicou-se auxina (AIB em pó, na concentração de 0,5%) antes da colocação da banda preta. Para a montagem do ensaio de enraizamento, as estacas foram preparadas com cerca de 7 cm e, em cada grupo dos pré-tratamentos prévios das plantas mãe (só escurecimento ou escurecimento e AIB), metade foram tratadas com AIB na mesma formulação e dosagem. Realizaram-se seis colheitas de material (base das estacas em enraizamento), ao longo do mês que se seguiu ao início do ensaio, para posterior observação de cortes histológicos. No dia 0 observaram-se diferenças em relação à testemunha (não submetida a escurecimento), especialmente ao nível da periderme e do xilema. Até ao dia 20 as diferenças estruturais das estacas submetidas ao tratamento prévio de escurecimento foram-se acentuando, com alteração da disposição normal dos tecidos e aparecimento, por vezes abundante, de callus. Outra alteração ocorreu ao nível do anel de fibras perivasculares que rodeia o floema, que começou a evidenciar rupturas. No tratamento que incluía o escurecimento e a aplicação de AIB na banda preta surgiram, a partir do dia 3, descontinuidades nesse anel que se acentuaram ao longo do tempo, até que a partir do dia 14 essa estrutura praticamente deixou de existir. A partir desse dia e especialmente no dia 20, observou-se uma grande proliferação das células de floema e córtex, em particular as células parenquimatosas e ainda alteração ao nível do câmbio que deixou de ser nítido e único. A aplicação de AIB à base da estaca antes de esta ser posta a enraizar não conduziu a diferenças tão evidentes como o tratamento de escurecimento. Para todos os tratamentos efectuados as modificações surgiram primeiro na zona do nó e só depois na zona do entrenó.